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實驗室應該如何選擇紫外可見分光光度計?
點擊次數:1969 發布時間:2020-03-18
  自從60年前紫外分光光度計出現在實驗室的工作臺之后,已經形成了一種能解決廣泛難題的儀器,從單一波長的測量到高性能多光譜的測量分析。實驗室選擇時需要根據自己實驗室的需要和目的用途來考慮,光學構造和光源、探測方法、樣品類型和數據處理等都是要考慮的因素。
 
  光學構造(OPTICALCONFIGURATION)
 
  一般來說,紫外光分光光度計分為單光束和雙光束兩類。顧名思義,單光束型主要是依賴單束光進行測量。一束給定波長的光通過對照物,然后再通過實際樣品溶液,就能得到吸光結果。
 
  雙光束型則是通過一個斬光輪(mirroredchopperwheel)將一束光分成兩束,分別測量對照樣品和實際樣品。可以小化光漂移(lampdrift)和減少測量時間。一些雙光型光度計不利用斬光輪,而是利用一種光束分光器來代替,將一束光分成兩束平行的光然后同時測量對照樣品和目的樣品。因為增加了測量的速度,所以雙光束分光光度計在測量一些溶液隨時間動態變化的研究中大有用處。
 
  光源和檢測方法(LIGHTSOURCESANDDETECTION)
 
  分光光度計的光譜也是需要考慮的一個重要因素。實驗室研究人員希望省錢購入專門儀器定量核酸、蛋白或者細菌的生長情況。例如AmershamBiosciencesofPiscataway公司的GeneQuantII能在230、260、280、320、595和600nm的波長下測量樣品。果果需要更大的靈活性,研究者可以考慮一種更高性能的寬光譜儀器,可以程序性地進行ELISAs分析和比色分析。
 
  紫外分光光度計一般覆蓋190nm和380nm波長,通常利用氘燈照明。一些特殊的儀器可以提供滿足光子學和半導體研究需要的光譜范圍。VarianofPaloAlto公司的CaryDeepUV和HitachiHighTechnologiesofTokyo的U-7000AutomatedVacuumUVSystem就是這樣的儀器。
 
  一些儀器具有多種光源供選擇:紫外光、可見光和甚至紅外光(780nm至3,000nm)。鎢燈和鹵素燈一般只覆蓋可見光部分(大約380nm到800nm)。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區域。
 
  分光光度計的帶寬(bandwidth)很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度。可以投射出實驗精確要求的光譜。一種嚴格帶寬使得儀器能對復雜的混合物進行高分辨率的吸光測量。可變的單色儀的狹縫寬度能使一臺分光光度計滿足多種實驗需要。
 
  為了測量吸光值,分光光度計制造商通常使用光電倍增管(photo-multipliertubes,PMTs)和光敏二極管。PMTs提供快速的反應時間和良好的靈敏度,并且可以在紫外光譜調節至特定的范圍。但一些制造商依賴于光敏二極管的動態范圍在數秒內行使所有的光譜測量。
 
  樣品類型(SAMPLEFORMAT)
 
  在大部分的樣品類型中,分光光度計可接受樣品孔、小玻璃管cuvette、吸漿管和微孔板。微孔板主要是滿足高通量的需要和大規模的實驗室需求。但盡管對于小實驗室來說,制造商仍然提供了多種容器轉換器來滿足通量的要求和減少實驗時間。
 
  用小試管cuvette裝樣品容量一般從1μl-5ml,并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來滿足各種改變需要。體現了柔韌性。
 
  數據管理(DATAMANAGEMENT)
 
  大部分單機型的分光光度計包含了驅動儀器運行和管理數據的軟件。高性能的儀器,通常與PC機一起聯用,需要從制造商提供額外的軟件。同時用戶也可以選擇升級軟件以滿足他們的需要。
 
  另外一個值得考慮的因素是數據的終使用。各獨立實驗室都有各自感興趣的實驗結果。例如一些藥物機構需要考慮美國FDA的要求和歐聯盟的藥物評價機構的要求選擇不同的數據處理方式。